前沿速递 | 6月HBV RNA研究新进展
2022-06-30 10:54:00
分类：前沿速递
6月，有关HBV RNA的研究取得了一些新的进展，主要是反映cccDNA的转录活性、HBeAg阳性患者血清各病毒学标志物的相关性分析、HBV RNA在HBeAg阴性病人体内水平评估、以及体外pgRNA合成转染动物模型。为乙肝新药的研发和潜在新靶点提供了新的思路。另外，中华医学会肝病学分会《中华肝脏病杂志》于本月28日发表的“慢性HBV感染者血清HBV RNA检测及临床应用专家共识” 明确了HBV RNA的存在形式、临床应用价值和定量检测技术。
大刊新文
Limited disassembly of cytoplasmic hepatitis B virus nucleocapsids restricts viral infection in murine hepatic cells.
[胞质内HBV核衣壳的有限解离限制了小鼠肝细胞中的病毒感染]
发表期刊：Hepatology
研究机构：武汉大学泰康医学院
文章作者：Kaitao Zhao，Fangteng Guo，Jingjing Wang，Youquan Zhong，Junzhu Yi，Yan Teng，Zaichao Xu，Li Zhao，Aixin Li，Zichen Wang，Xinwen Chen，Xiaoming Cheng，Yuchen Xia
内容摘要：该研究对比了HBV病毒进入人类肝细胞和进入小鼠肝细胞后的感染过程的不同之处。转染HBV pgRNA可以在人类中建立HBV复制，但在缺少hNTCP受体的小鼠肝脏细胞中则不能。因此该团队通过建立转染体外合成的pgRNA模型探索HBV在小鼠肝细胞中具体受限制的步骤。
体外合成pgRNA模型如下：
具有5’-capping以及3’-Poly A修饰的体外转录pgRNA转染到肝细胞中引起HBV病毒颗粒复制。(I) HBc和Pol从pgRNA翻译而来；(II) Pol和pgRNA被HBc包裹形成核衣壳，Pol将pgRNA逆转录为rcDNA；(III) 核衣壳会释放rcDNA，经过修复之后形成cccDNA；(IV) cccDNA下游转录为不同长度的HBV RNAs；(V) HBV相关蛋白，包括HBsAg等进行翻译，最后形成结构完整的HBV病毒颗粒。
图1：转染pgRNA以建立HBV复制示意图
后续结果显示，小鼠细胞支持HBV基因组rcDNA的核转运及rcDNA分子修复形成cccDNA，提示核心的限制感染的步骤是HBV核衣壳的有限解离。
目前全世界大约有2.57亿人正在遭受HBV感染的困扰，而由于缺少简易的模式动物感染模型，HBV 相关的机理研究和药物研究都受到了较大的阻碍。而本研究利用建立体外合成的pgRNA模型转染小鼠肝细胞，聚焦于HBV不能在小鼠细胞中感染的原因，或为研究和开发乙肝新药提供新的分子机理和思路。
Serum HBV DNA plus RNA reflecting cccDNA level before and during NAs treatment in HBeAg positive CHB patients.
[HBV DNA和HBV RNA反映HBeAg阳性慢乙肝病人cccDNA转录活性]
发表期刊：International Journal of Medical Sciences
研究机构：首都医科大学附属北京佑安医院 & 北京大学基础医学院
文章作者：Yang Wang, Yanna Liu, Hao Liao, Zhongping Deng, Dandan Bian, Yan Ren, Guangxin, Yingying Jiang, Li Bai, Shuang Liu, Mei Liu, Li Zhou，Yu Chen，Xinyue Chen, Zhongping Duan, Fengmin Lu, Sujun Zheng
内容摘要：研究纳入44名长期接受NA治疗的HBeAg阳性病人。在基线和第60个月时进行HBV血清病毒学指标采集。在基线时，血清 HBV DNA + HBV RNA 与肝内 cccDNA 呈正相关多元回归分析(β=0.205，P<0.001)。在cccDNA与血清病毒学标志物的相关性分析中，HBV DNA + HBV RNA的相关系数最高(r=0.698，P<0.001)。第60个月，未观察到这些血清病毒标志物与cccDNA之间的相关性(P>0.05)。多元回归分析表明，只有HBV DNA+RNA的减少与cccDNA的下降才具有正相关性(β=0.172，P=0.006)。HBV DNA + HBV RNA的变化(r=0.525，P=0.001)， 与HBV RNA(r=0.384，P=0.008)、 HBV DNA(r=0.431，P=0.003)、HBsAg (r=0.342， P=0.029)相比，与cccDNA下降相关性更强。
图2：HBeAg阳性患者基线时病毒标志物的相关性分析
图3：HBeAg阳性患者第60个月时病毒标志物的相关性分析
Evaluation of pregenomic RNA in HBeAg-negative patients.
[评估pgRNA在HBeAg阴性病人体内水平]
发表期刊：New microbiologica
研究机构：Orsola-Malpighi University Hospital
文章作者：Greta Roncarati, Silvia Galli, Tiziano Ferniani, Alessandra Moroni, Tiziana Lazzarotto
内容摘要：研究入组85例CHB病人，74例CIB(慢性HBeAg阴性感染)病人，监测病人pgRNA、qHBsAg 和 HBV DNA水平。总体而言，pgRNA水平与qHBsAg (r=0.30，P<0.001)，pgRNA与HBV DNA (r=0.73，P<0.001)之间以及pgRNA与ALT (r=0.67，P<0.001) 之间存在正相关关系。在85名CHB患者中，82名(96.5%)同意开始治疗。在基线时，38/82名患者以及3名未经治疗的CHB患者具有检测不到的pgRNA水平。74个CIB携带者也具有检测不到的pgRNA水平。在随访期间，没有患者经历病毒再激活或肝病进展。这些结果表明，在HBeAg阴性患者的传统诊断流程图中增加HBV-pgRNA水平可以改善对有风险病例的正确识别。
专家共识
中华医学会肝病学分会《中华肝脏病杂志》于本月28日发表的“慢性HBV感染者血清HBV RNA检测及临床应用专家共识”对新指标血清HBV RNA的检测指出了临床应用的意义。自1996年在慢乙肝患者外周血里发现游离的HBV RNA以来，不断有国内外的研究试图阐述HBV RNA病毒颗粒的生命周期、生物学特征以及临床应用价值。而该共识指出，血清HBV RNA来源于未经逆转录的pgRNA(pregenomic RNA)，存在于有病毒外包膜包裹或裸的核衣壳内。除全长3.5kb的pgRNA之外，还存在HBV pgRNA剪接变异体和3′端截断型pgRNA。由于是cccDNA的直接转录物，可以准确反映cccDNA的活性，能够预测NAs治疗应答或PEG-IFN-α治疗应答、指导患者NAs停药、预测肝细胞癌及其他感染性慢性肝病的发生和发展。该共识除了总结HBV RNA的存在形式以及临床应用价值之外，更明确了目前可用于定量检测HBV RNA的技术。除了常规的RT-PCR技术对HBV RNA进行定量检测外，共识特别指出了SAT技术，即实时恒温扩增和检测技术(simultaneous amplification and testing) 用于血清HBV RNA的高敏定量检测，充分肯定了该技术规避核酸提取产物中混杂的DNA对HBV RNA定量干扰的特点。
参考文献
[1] Zhao, Guo, F., Wang, J., Zhong, Y., Yi, J., Teng, Y., Xu, Z., Zhao, L., Li, A., Wang, Z., Chen, X., Cheng, X., & Xia, Y. (2022). Limited disassembly of cytoplasmic hepatitis B virus nucleocapsids restricts viral infection in murine hepatic cells. Hepatology (Baltimore, Md.). https://doi.org/10.1002/hep.32622.
[2] Huang, Wang, J., Li, W., Chen, R., Chen, X., Zhang, F., Xu, D., & Lu, F. (2022). Serum HBV DNA plus RNA shows superiority in reflecting the activity of intrahepatic cccDNA in treatment-naïve HBV-infected individuals. Journal of Clinical Virology, 99-100, 71–78. https://doi.org/10.1016/j.jcv.2017.12.016.
[3] Greta Roncarati, Silvia Galli, Tiziano Ferniani, Alessandra Moroni, Tiziana Lazzarotto. (2022). Evaluation of pregenomic RNA in HBeAg-negative patients. New microbiologica. Apr;45(2):104-110.
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