【论文一分钟】灵敏度之争 —— MP-SAT VS Real-time PCR
2018-11-30 14:43:00
分类：顶刊鉴析
实时荧光恒温扩增技术（SAT）检测病原体RNA，Real-time PCR技术检测病原体DNA；虽都为核酸检测，但检测靶标不同，那么两种方法临床应用的结果有什么不同呢？
浙江大学医学院附属儿童医院检验科在《PLoS One》发表了Evaluation of a real-time method of simultaneous amplification and testing in diagnosis of Mycoplasma pneumonia infection in children with pneumonia一文， 研究了SAT和实时荧光PCR在诊断肺炎支原体感染的应用价值。
THE FRIST
THE SECEND
研究结果：
一、MP-SAT灵敏度、特异性分析
（1）为确定MP-SAT法的检测范围，将肺炎支原体标准品M129 (ATCC 29342)连续10倍稀释到101 ~ 107 CFU /ml。采用MP-SAT和实时荧光PCR进行检测。
（2）为评价MP-SAT的特异性，本研究也对于临床上常见的19种呼吸道病原菌进行了检测，包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等7种细菌，腺病毒、呼吸道合胞体病毒、流感病毒等7种病毒，以及、沙眼衣原体、解脲脲原体、唾液支原体等5种支原体和衣原体。
二、比较分析MP-SAT、实时荧光PCR技术和IgM-ELISA检测结果
在研究期间，对每个儿童进行双样本采集后，对样本进行MP-SAT检测和实时荧光PCR检测。共315个样品，其中咽拭子样本197个，痰标本128个。同时采集每个孩子的血液样本进行IgM抗体检测。
结果显示，MP-SAT、Real-time PCR、IgM-ELISA检测的样本阳性率分别为16.51%、15.56%和12.70%。
其中，MP-SAT与IgM-ELISA比较有统计学差异（P=0.04）, IgM法检测阳性率低于MP-SAT，可能是因为IgM检测存在窗口期，造成假阴的结果。
MP-SAT与Real-time PCR比较无统计学意义（P=0.25）。但有3例Real-time PCR阴性的样本，MP-SAT检测的Ct值分别为20.46、23.22、22.16。考虑到MP-SAT有较高的灵敏度，这三例样本可能低于Real-time PCR的检测下限。
THE END
本研究中，MP-SAT检测的靶标是rRNA，由于RNA能够快速分解，因此它相对于DNA更不稳定。由于MP-SAT的扩增产物也是RNA，因此能有效降低实验室污染导致的假阳性。
本研究的结果显示， MP-SAT比Real-time PCR对肺炎支原体（MP）更敏感，其检测最低浓度为101CFU/ml。这种优越的灵敏度可能是由于在相同浓度的肺炎支原体中，rRNA浓度水平（拷贝数）高于DNA。此外，MP-SAT的扩增效率比PCR更高（MP-SAT可在一个循环中产生102-103反应产物）。
MP-SAT在鉴别诊断肺炎支原体方面也有较好的特异性，研究对于19种常见呼吸道感染的病原体同时检测，在其他病原体中无交叉反应。
综上所述，MP-SAT是一种检测方便快速（实验时间2-3小时）、灵敏度高、特异性高的检测肺炎支原体的检测技术，MP-SAT值得成为临床医生的有效诊断工具。
尤其适用于早期发现肺炎支原体的感染，可有效提高患儿肺炎支原体的检出率。
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